معلومة

هل يمكن استخدام ELISA للكشف عن إنزيم النبات؟ عمل مقايسة لانزيم جديد

هل يمكن استخدام ELISA للكشف عن إنزيم النبات؟ عمل مقايسة لانزيم جديد



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

إذا كان الهدف هو توليد اختبار سريع لإنزيم مصدر نباتي ، فما هي الخيارات النموذجية؟

على سبيل المثال ، هل يمكن للمرء أن يفعل شيئًا مثل: إنتاج جسم مضاد للإنزيم ثم استخدامه لإنشاء ELISA؟ هل سيكون حقن الحيوانات هو السبيل لتوليد الجسم المضاد المحدد المطلوب؟

إذا لم يكن الأمر كذلك ، فما الذي يتم فعله عادةً في مثل هذه الحالات. كيف يمكن للمرء أن يبتكر مقايسة لأنزيم جديد من مصدر نباتي. هل توجد طرق بديلة تتجنب تكوين الأجسام المضادة؟


أريد أن أضيف شيئًا فوق إجابة كريس.

عادة ما يكون إنتاج الجسم المضاد عملية بطيئة (ومكلفة) ، والبديل الذي يستحق النظر فيه هو عرض الملتهمة (https://en.wikipedia.org/wiki/Phage_display). بمجرد العثور على العاثية التي تربط بشكل فعال البروتين الذي يهمك ، يمكنك استخدامه بدلاً من الجسم المضاد فيما يسمى اختبار Phage-ELISA. ومع ذلك ، ضع في اعتبارك أن ELISA (أو Phage-ELISA) سوف يعطيك معلومات حول وجود وتركيز الإنزيم ، فلن يعطيك أي تلميح حول نشاطه.


أعتقد أن أكثر الطرق الواعدة تستخدم الأجسام المضادة. يمكنك إما تطوير ELISA أو إجراء تحليل لطخة غربية للمواد النباتية - كلاهما يحتاج إلى جسم مضاد جيد ومحدد. لتوليد هذه ، يتم حقن البروتين المطلوب (أو أجزاء منه على الأقل) في الحيوانات (عادةً الفئران أو الأرانب) ثم يتم سكب الأجسام المضادة من دم هذه الحيوانات. هذه الأجسام المضادة متعددة النسيلة ، لكن هذا النهج سريع إلى حد ما ويمكن إجراؤه في غضون أسابيع قليلة.

إذا كنت ترغب في استخدام مصدر أكثر استدامة للأجسام المضادة ، فإن الخلايا المنتجة للأجسام المضادة من هذه الحيوانات يتم عزلها وتخليدها ووصفها بأنها مستنسخة مفردة للحصول على أجسام مضادة وحيدة النسيلة.

نظرًا لأنك تستخدم إنزيمًا ، يمكنك أيضًا التفكير في فحوصات النشاط. لذلك إما أن يتم استقلاب ركيزة كروموجينية أو فلورية ، أو يمكنك استخدام تفاعلات مقترنة حيث يستخدم إنزيمك ركيزة يتم إعادة تعبئتها بواسطة تفاعل آخر - الأمثلة الكلاسيكية هنا هي التفاعلات المزدوجة التي تستخدم NADH أو ATP.

من الممكن أيضًا قياس معدل التمثيل الغذائي إذا كانت الركيزة أو منتج الإنزيم الخاص بك يظهر تألقًا. ثم يمكنك إما قياس انخفاض الركيزة الخاصة بك أو زيادة منتجك.


  • لوحة ELISA جاهزة للاستخدام مع تحضير سريع وبسيط للعينات
  • أداء دقيق وحساس ومتسق
  • تم التحقق من صحتها على المصل والبلازما واللعاب وطاف مستنبت الخلايا والبول
القط. اسم المنتج سعر
L00847 SARS-CoV-2 مجموعة الكشف عن الأجسام المضادة المعادلة اقتبس
L00845 SARS-CoV-2 Spike S1-RBD IgG & ampIgM ELISA Detection Kit اقتبس
L00846 SARS-CoV-2 NP & ampRBD Total Antibody ELISA Detection Kit اقتبس

تعرف على المزيد حول مجموعة أدوات الكشف عن الأجسام المضادة لتحييد SARS-CoV-2.


اختبارات ELISA

ELISA هو اختصار لـ & quot؛ مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالأنزيم. & quot في عام 1974 ، طور P. اختبار ELISA متعدد الاستخدامات ويمكن للمهنيين الطبيين إجراؤه بسهولة مقارنة بالاختبارات الأخرى الأكثر تعقيدًا ، حيث تتوفر العديد من الاختلافات التجارية.

ما هو اختبار ELISA؟

يستخدم اختبار ELISA مكونات الجهاز المناعي (مثل الأجسام المضادة IgG أو IgM) والمواد الكيميائية لاكتشاف الاستجابات المناعية في الجسم (على سبيل المثال ، للميكروبات المعدية). يتضمن اختبار ELISA إنزيمًا (بروتين يحفز تفاعل كيميائي حيوي). كما يتضمن أيضًا جسمًا مضادًا أو مستضدًا (جزيئات مناعية) قد يشكل تفاعلًا مضادًا لجسمًا مضادًا لتوفير نتيجة إيجابية أو ، إذا لم يتفاعلوا ، نتيجة سلبية. تتضمن أمثلة استخدامات اختبار ELISA تشخيص العدوى مثل فيروس نقص المناعة البشرية (فيروس نقص المناعة البشرية) وبعض أمراض الحساسية مثل الحساسية الغذائية والتحقيقات التجريبية لتحديد المركبات (مستضدات من محلول الخلية في مجموعة واسعة من الكائنات الحية). تُعرف اختبارات ELISA أيضًا باسم مقايسة الممتز المناعي أو المقايسة المناعية للإنزيم عندما يرتبط الإنزيم بمادة أخرى كمؤشر (يمكن أن يتسبب في تغيير اللون ، على سبيل المثال).

يعتمد الاختبار على صفيحة ميكروتيتر تحتوي على ركيزة طور صلبة (بروتين مستهدف ، مستضد) بتركيز معروف مثبت على الصفيحة التي عند تعرضها لجسم مضاد متصل بمؤشر (صبغة لتغيير اللون أو جسم مضاد مرمز بالإنزيم) التي يمكن أن تنتج تغيير اللون. اعتمادًا على منحنى قياسي لامتصاص الجسم المضاد المسمى بالإنزيم مقابل مستوى المستضد فيما يتعلق بتغير لون الصبغة ، قد توفر الاختبارات شبه اقتباسية و / أو كمية و / أو تحديد العديد من المواد المتنوعة. يسمى هذا النوع من الاختبار بـ ELISA المباشر.

هناك أنواع أخرى من اختبارات ELISA. يستخدم ELISA غير المباشر جسمًا مضادًا ثانويًا لربطه بالركيزة ، وشطيرة ELISA التي تستخدم الجسم المضاد كركيزة مثبتة على لوحة microtiter. للحصول على أمثلة وتفاصيل إضافية ، راجع http://ruo.mbl.co.jp/bio/e/support/method/elisa.html.

أنواع اختبارات ELISA

تحليل فيروس نقص المناعة

عادة ما يتم إجراء اختبار الأجسام المضادة على عينة دم ، وغالبًا ما يتم استخدام مقايسة مرتبطة بالإنزيم تسمى ELISA أو EIA. في هذا الاختبار ، يُسمح لمصل الشخص بالتفاعل مع بروتينات الفيروس التي تم إنتاجها في المختبر. إذا كان الشخص مصابًا بفيروس نقص المناعة البشرية ، فإن الأجسام المضادة في المصل سترتبط ببروتينات فيروس نقص المناعة البشرية ، ويمكن قياس مدى هذا الارتباط. عادة ما تكون النتائج السلبية لـ EIA متاحة في يوم أو نحو ذلك.

ما فائدة اختبار ELISA؟

تكتشف اختبارات ELISA بشكل أساسي البروتينات (على عكس الجزيئات والأيونات الصغيرة مثل الجلوكوز والبوتاسيوم). كثيرًا ما يستخدم المهنيون الطبيون اختبارات ELISA كاختبارات دم للكشف عن المستضدات التي قد تكون موجودة في الدم. يمكن أن تشمل المواد التي تم الكشف عنها بواسطة اختبارات ELISA الهرمونات ، ومسببات الحساسية ، ومستضدات الفيروسات (حمى الضنك ، على سبيل المثال) ، والمستضدات البكتيرية (السل ، على سبيل المثال) ، والأجسام المضادة التي صنعها الجسم استجابةً للعدوى (الأجسام المضادة لالتهاب الكبد B ، من أجل مثال) أو التطعيم. يمكنهم أيضًا تحديد عامل الأمراض المعدية في المرضى.

ما هي مجموعة إليسا؟

مجموعة ELISA عبارة عن اختبار ELISA متوفر تجاريًا والذي يحتوي عادةً على ألواح البوليسترين المطلية مسبقًا ، والأجسام المضادة للكشف ، وعادةً جميع المواد الكيميائية اللازمة لإجراء اختبار ELISA. ومع ذلك ، يمكن للأشخاص شراء مجموعات خاصة بالمواد التي يحددها العميل.

عرض الشرائح

كيف يعمل اختبار ELISA?

هناك اختلافات في اختبار ELISA (انظر أدناه) ، ولكن النوع الأكثر استخدامًا يتكون من جسم مضاد متصل بسطح صلب (لوح البوليسترين). هذا الجسم المضاد له تقارب (سوف يلتصق بـ) المادة محل الاهتمام ، مثل الهرمون أو البكتيريا أو أي جسم مضاد آخر. على سبيل المثال ، يمكن الكشف عن هرمون موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية (HCG) ، وهو البروتين الذي يتم قياسه بشكل شائع والذي يشير إلى الحمل ، بواسطة ELISA. يتم إضافة مزيج من HCG المنقى المرتبط بإنزيم وعينة الاختبار (الدم أو البول) إلى نظام الاختبار. في حالة عدم وجود HCG في عينة الاختبار ، فإن الإنزيم المرتبط فقط هو الذي سيرتبط بالسطح الصلب. كلما زادت أهمية المادة الموجودة في عينة الاختبار ، كلما ارتبط الإنزيم الأقل ارتباطًا بالسطح الصلب. كلما زاد وجود مادة الاهتمام ، سيؤدي ذلك إلى حدوث رد فعل ويظهر على لوحة الاختبار بطريقة ما ، مثل تغيير لون المحلول (أو مثل اختبار الحمل وخطوط وردية زهرية & quot أو علامة & quot + & quot).


ركائز ELISA كيميائية

نحن نقدم العديد من ركائز الإنارة الكيميائية لتطوير ELISA مع إنزيم بيروكسيديز الفجل (HRP) والفوسفاتيز القلوي (AP):

إجمالي عدد المقايسات بناءً على صفيحة ميكروسكوبية 96 بئرًا. راجع تعليمات المنتج للحصول على معلومات إضافية واعتبارات الفحص التي تحدد عدد المقايسات.
² تم تعميم حدود الاكتشاف والتخفيفات الموصى بها من الأجسام المضادة (بناءً على مخزون 1 مجم / مل) كوسيلة لبدء التحسين. قد تتطلب المقايسات الفردية شروطا خارج النطاقات المقترحة هنا.
الطول الموجي الذروة للإرسال معطى كمرجع. ومع ذلك ، للحصول على أفضل حساسية ، قم بقياس إجمالي ناتج الضوء باستخدام مقياس اللمعان.

ركائز ELISA المتوهجة كيميائيًا في لمحة

CSPD و CDP-Star عبارة عن ركائز فوسفاتيز قلوية 1،2-ديوكسيتان كيميائية تبعث الضوء بأقصى شدة للضوء بطول موجة يبلغ 475 نانومتر. هذه الركائز عبارة عن ركائز "متوهجة" وتوفر أقصى إشارة ثابتة بمرور الوقت فقط بعد 15-60 دقيقة حسب درجة الحرارة. يتم توفيرها عند 5 أو 25 مم (على التوالي) في المخزن المائي. يمكن تحسين الحساسية بإضافة معززات التلألؤ Sapphire-II أو Emerald-II.

DynaLight Substrate مع RapidGlow Enhancer عبارة عن تركيبة ركيزة مضيئة كيميائي جاهزة للاستخدام تم تحسينها لتحقيق نتائج أسرع في الاختبارات القائمة على الحلول. يتم تصنيف هذه الركيزة على أنها ركيزة وميض وتوهج توفر إشارة قصوى سريعة ومستدامة في وقت مبكر من 2-10 دقائق. تشتمل ركيزة DynaLight مع تركيبة RapidGlow المُحسِنة على ركيزة إضاءة كيميائية 1،2-dioxetane ومُحسِّن بوليمري يتيح الكشف عن المقايسة المناعية فائقة الحساسية بواسطة ملصق الفوسفاتيز القلوي.

توفر الركيزة SuperSignal ELISA Pico Chemiluminescent أداءً ممتازًا لمجموعة كبيرة من كميات البروتين المستهدفة ويمكن تحسينها بسهولة للكشف بحساسية أكبر من الركائز اللونية للمبتدئين. توليد سريع للإشارة مع استقرار إشارة لمدة 5-30 دقيقة اعتمادًا على تركيز HRP.

SuperSignal ELISA Femto Maximum Sensitivity Substrate هي واحدة من أكثر الركائز حساسية المتاحة لتطبيقات ELISA. عند تحسينه بشكل صحيح ، يكون الحد الأدنى للكشف هو 1 إلى 10 أوامر من حيث الحجم أقل من الركائز اللونية شائعة الاستخدام. ومع ذلك ، بدون التحسين المناسب ، من السهل إغراق النظام بالبروتين والإنزيم ، مما يؤدي إلى خلفية عالية وربما نتائج سلبية.


المقايسات المناعية: مصفوفات البروتين مقابل ELISA والغربان

توسعت دراسات الأنظمة البيولوجية إلى ما وراء نموذج "جين واحد ، بروتين واحد" إلى مجال البروتينات ، أو دراسة أعداد كبيرة من البروتينات التي تعمل في مجموعة من الأنظمة البيولوجية المعقدة. وهكذا في حقبة ما بعد الجينوم ، تم دفع التكنولوجيا لتقديم فحوصات متعددة تسمح لنا بمراقبة بروتينات متعددة بشكل متوازٍ ، مما يؤدي إلى مزيد من المعلومات ذات الصلة من الناحية البيولوجية. تُستخدم فحوصات Multiplex للبحث الأساسي واكتشاف العقاقير لفحص آلاف البروتينات أو "البروتين" في عينة. بالنسبة للتشخيص السريري ، فإن مراقبة عدد قليل من البروتينات مع عناصر التحكم كافية. ومع ذلك ، في كلتا الحالتين ، تعد الخصوصية والحساسية وتوافر العينة وتكاليف الكاشف وسهولة الاستخدام معايير رئيسية لاختيار البروتوكول.

لا تزال المقايسات المناعية هي المنصة المفضلة لمعظم دراسات البروتين ، وخاصة التشخيص السريري وتطوير الأدوية ، حيث تكون الخصوصية أمرًا بالغ الأهمية. كانت المقايسات القائمة على الأجسام المضادة ، بما في ذلك الالتقاط المناعي في أجهزة التدفق الجانبي ، والطبقة المناعية (لطخة غربية) و ELISA (اختبار الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم) موجودة منذ عقود ، وتم تكييفها على نطاق واسع في التشخيصات السريرية. غالبًا ما يكون الخيار الأول هو الملاءمة - باستخدام التكنولوجيا المتوفرة وتلك التي تم إنشاؤها بالفعل في المختبر أو المجتمع المجاور. توضح هذه المقالة الميزات والفوائد النسبية للمقايسات المستندة إلى الأجسام المضادة ، بمقارنة المصفوفات الدقيقة الغربية و ELISA والبروتين.

عادةً ما يتم إجراء البقع الغربية لتحديد وجود بروتين معين وسلامته. في هذا الاختبار ، يتم أولاً فصل خليط من البروتينات على أساس الوزن الجزيئي و / أو الشحنة بواسطة الرحلان الكهربائي في مصفوفة هلامية ، ثم يتم نقلها إلى غشاء وفحصها بجسم مضاد خاص بالبروتين المعني. يمكن مقارنة وتقريب الكمية النسبية للبروتين في عينات مختلفة. نظرًا لأن البروتينات الموجودة في الخليط يتم فصلها أولاً وفقًا للخصائص الفيزيائية ، يمكن أن تكون خصوصية الغرب عالية جدًا ، ويمكن تمييز أي تفاعل تبادلي للجسم المضاد الكاشف مع البروتينات الأخرى في الخليط بالوزن الجزيئي المعروف للبروتين من اهتمام. تقتصر اللطخات الغربية على اكتشاف البروتين المشوه لأن جميع البروتينات في العينة يتم تغيير طبيعتها قبل خطوة الفصل الكهربائي. على الجانب السلبي ، تعتبر اللطخات الغربية معقدة نسبيًا من الناحية الفنية ، وتتطلب العديد من الخطوات وحجم عينة كبير نسبيًا ، وبالتالي فهي ليست آلية سهلة وتستغرق وقتًا طويلاً ومكلفة نسبيًا.

غالبًا ما يتم إجراء فحوصات ELISA في 96 طبقًا جيدًا وتكون قابلة للتكيف مع إنتاجية أعلى من اللطخات الغربية ، ولكن مثل البقع الغربية تقدم بيانات أحادية فقط ، أو نتائج بروتين واحد لكل فحص. على عكس الفحص الغربي ، يمكن استخدام ELISA لاكتشاف البروتينات الأصلية وتفاعلات البروتين التي تتطلب بنية ثلاثية الأبعاد سليمة. يمكن أن تكون فحوصات ELISA كمية عالية عند تشغيلها بمنحنى قياسي للبروتين المعروف ، والأجسام المضادة جيدة التوصيف. ومع ذلك ، فإن هذه المقايسات ليست محددة بدرجة عالية ويمكن أن تعطي نتائج إيجابية خاطئة بسبب التفاعل المتبادل بين الجسم المضاد الكاشف والبروتينات الأخرى في العينة. تعتبر اختبارات ELISA مفيدة جدًا للنظر في تفاعلات البروتين التي تتطلب تشكلاً محليًا ، ولدراسة المنافسة الملزمة. بالإضافة إلى ذلك ، تعتبر مقايسات ELISA أقل صعوبة من الناحية الفنية من اللطخات الغربية ، ويمكن تكييفها مع إنتاجية أعلى من خلال أنظمة المعالجة والكشف الآلي للصفائح.

تشبه المصفوفات الدقيقة للبروتين ELISA أكثر من اللطخة الغربية لأن البروتينات في العينة عمومًا لا يتم تجزئتها قبل الفحص. في بناء المصفوفات الدقيقة ، يتم ترسيب البروتينات في بقع صغيرة (100-300 ميكرومتر) على شريحة مجهرية مغلفة خصيصًا. غالبًا ما تكون الشريحة مغطاة ببوليمر مثل النيتروسليلوز أو الجل الذي يزيد من قدرة الارتباط بالبروتين. توفر المصفوفات الدقيقة مزايا الإنتاجية العالية ، والتحليل المتعدد ، واستهلاك الكاشف المنخفض ، والحساسية العالية ، ومتطلبات العينة الأقل مقارنة بالمقايسات الغربية أو اختبارات ELISA (انظر الجدولين الأول والثاني).

تتوفر الآن مصفوفات البروتين المتاحة تجاريًا والتي تقدم مصفوفات مطبوعة مسبقًا من مئات إلى آلاف البروتينات ، وهي عادةً أجسام مضادة تستخدم لالتقاط البروتينات مثل ELISA. إن تصنيع المصفوفات الدقيقة هو في الواقع عملية تستغرق وقتًا طويلاً ومكلفة وغير مجدية بشكل عام للباحث الفردي. والأهم من ذلك ، أن محتوى الجسم المضاد الذي تم رصده على المصفوفات الدقيقة هو المكون الأكثر قيمة والأكثر تكلفة. ومع ذلك ، فإن كمية الجسم المضاد المطلوبة للمصفوفة الدقيقة وكذلك متطلبات العينة أقل بكثير من ELISA. تحافظ ميكروأري البروتين على الكواشف وكذلك العينات الثمينة. وبالتالي ، بالنسبة للمقايسات عالية الإنتاجية أو المتكررة للغاية ، يمكن أن تفوق تكاليف الكاشف المخفضة وتوفير الوقت وحفظ العينة للمصفوفة الدقيقة التكلفة النسبية للإعداد (أي طباعة المصفوفات أو شرائها ، انظر الجدول الثاني). بالإضافة إلى ذلك ، قد تكون كمية البروتين أو الجسم المضاد محدودة في بعض الحالات (على سبيل المثال ، كميات محدودة من الأجسام المضادة متعددة النسيلة أو عينة المريض للتشخيص).

طورت Grace Bio-Labs تقنية رائدة للمصفوفات الدقيقة للبروتينات الحساسة وعالية الجودة. توفر شرائح فيلم النيتروسليلوز الخاصة بنا أعلى قدرة على ربط البروتين ، مما يؤدي إلى حساسية ممتازة (تصل إلى XX بيكوغرام / مل). لقد طورنا مجموعة من الكواشف المصممة لتحسين النتائج باستخدام هذه المصفوفات من حيث الحساسية (الإشارة / الضوضاء) وإمكانية التكاثر. إذا كنت مهتمًا بتطوير المقايسات المناعية بتنسيق ميكروأري البروتين ، فنحن ندعوك للمشاركة معنا في المحتوى الذي تختاره.

الجدول الأول: الخصائص النسبية لمقايسات Western Blot و ELISA و Microarray.


إليسا خطوة بخطوة

يتم تجميد الجسم المضاد للقبض المحدد على ألواح عالية الارتباط بالبروتين عن طريق الحضانة طوال الليل. يتم حظر الأطباق بالبروتين غير ذي الصلة على سبيل المثال الزلال.

تم حذف هذه الخطوة عند استخدام ألواح مطلية مسبقًا لشركة Mabtech.


عدوى الأنفلونزا الفيروسية في الجهاز التنفسي - طرق محتملة للرصد

3.8 مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم

ELISA هي طريقة المعيار الذهبي للكشف عن مجموعة واسعة من الجزيئات المستهدفة بمساعدة الجزيئات الشريكة المناسبة. يتم استخدام ELISA ليس فقط للكشف ولكن أيضًا للفحص الأساسي للعديد من الأمراض المهمة ، مثل فيروس نقص المناعة البشرية والإنفلونزا وما إلى ذلك. جوبيناث وآخرون. 14 أظهروا الكشف المستند إلى ELISA عن فيروس الأنفلونزا باستخدام الأجسام المضادة لـ H3N2 وميزوا ضد فيروسات الأنفلونزا الأخرى. نظرًا لحساسيتها العالية وانتقائها ، تساعد ELISA في تحديد الجزيئات المستهدفة ، حتى في عينات الإنسان الخام (المصل والبول واللعاب). حتى الآن ، تم استخدام الأجسام المضادة بشكل شائع كمسبار للكشف عن الجزيئات الحيوية في ELISA. بشكل عام ، تم الكشف عن ارتباط الهدف (المستضد) والمسبار (الجسم المضاد) على لوحة ELISA بواسطة الإنزيم (على سبيل المثال ، بيروكسيداز الفجل (HRP) ، الفوسفاتيز القلوي) مترافق مع جسم مضاد ثانوي واكتشافه بواسطة ركائز كروموجينية. تم استخدام اقتران البيوتين-ستربتافيدين أيضًا لتحسين طرق ELISA. في هذه الحالة ، تم الكشف عن الجسم المضاد الثانوي المعالج بالبيوتين بواسطة إنزيم مترافق بالستربتافيدين. يتم استخدام أنواع مختلفة من الأنماط في طريقة ELISA لتحسين طرق الكشف ، مثل ELISA المباشر وغير المباشر والساندويش والتنافسي. في معظم الحالات ، تم استخدام الجسم المضاد كمسبار نظرًا لارتباطه القوي واستقراره وانتقائيته. عادة ما يتم إجراء ELISA الشطيرة بواسطة الجسم المضاد أحادي النسيلة أو متعدد النسيلة للهدف المحدد (الشكل 2.7). في بعض الحالات ، تم استخدام منطقة Fc فقط من الجسم المضاد كجزيء الالتقاط على لوحة ELISA. بعد جيل aptamer ، استخدم بعض الباحثين aptamer كمسبار بدلاً من الجسم المضاد. تسمى هذه الطريقة مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالأبتامر (أليسا). 46 نظرًا لأن aptamer لديه حساسية أعلى من الجسم المضاد ، فمن الممكن زيادة حد الكشف عند استخدام aptamer كمسبار. بالإضافة إلى ذلك ، هناك إمكانية لإجراء اختبار شطيرة باستخدام نوعين مختلفين من الأبتاميرات لنفس الهدف. نظرًا لأن كلاً من aptamer والجسم المضاد مناسبان كجزيئات كشف ، فهناك احتمال أكبر لزيادة حد الكشف باستخدام أنماط الساندويتش باستخدام aptamer والأجسام المضادة.

الشكل 2.7. مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)

هناك ثلاثة أنواع أساسية من ELISAs (مباشر ، غير مباشر ، وساندويتش). هنا يتم عرض شطيرة ELISA كمثال.


الملخص

فيراتروم كاليفورنيكوم كان مسؤولاً عن خسائر كبيرة في رعي الأغنام في السلاسل الجبلية العالية في وسط ولاية أيداهو في الخمسينيات من القرن الماضي. فيراتروم يتسبب في العديد من العيوب الخلقية بما في ذلك العيب القحفي الوجهي من النوع الدائري (الحملان ذات وجه القرد) الذي يحدث على وجه التحديد في الحملان بعد رعي النعاج الحوامل للنبات في اليوم الرابع عشر من الحمل. قلويدات الستيرويد السيكلوبامين (1) وجيرفين (2) من فيراتروم وتبين أنها مسؤولة بشكل أساسي عن التشوهات. سيكلوبامين (1) وجيرفين (2) هي مواد مسخية قوية تمنع إشارات القنفذ الصوتي (Shh) أثناء التطور الجنيني في مرحلة المعيدة ، مما ينتج عنه cyclopia و holoprosencephaly. على الرغم من الخسائر التي لحقت بصناعة الأغنام من فيراتروم أصبحت الآن نادرة نسبيًا ، ولا يزال يتم الإبلاغ عن حوادث عرضية من السموم والتشوهات القحفية الوجهية في الأغنام والأنواع الأخرى. ومع ذلك ، فإن الفوائد التي تعود على الأبحاث الطبية الحيوية باستخدام السيكلوبامين (1) كأداة لدراسة الأمراض التي تصيب الإنسان بشكل كبير. مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم التنافسي (ELISA) لاكتشاف وقياس السيكلوبامين (1) وجيرفين (2) باستخدام الأجسام المضادة متعددة النسيلة المنتجة في النعاج. كانت حدود الكشف عن المقايسة 90.0 و 22.7 بيكوغرام للسيكلوبامين (1) وجيرفين (2)، على التوالى. تم استخدام هذا الاختبار لاكتشاف وقياس السيكلوبامين (1) في دم الغنم. توضح طرق الاستخراج البسيطة − ELISA التي تم تطويرها في هذه الدراسة إمكانية استخدام هذه التقنيات للفحص السريع للعينات البيولوجية لاكتشاف وجود وتركيز السيكلوبامين (1) وجيرفين (2) وستكون مفيدة للدراسات الدوائية وتشخيص الثروة الحيوانية.

الكلمات الرئيسية: المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم ELISA cyclopamine jervine فيراتروم كاليفورنيكوم قلويدات

المؤلف الذي يجب توجيه المراسلات إليه [هاتف (435) 752-2941 فاكس (435) 753-5681 بريد إلكتروني [email & # 160protected]].


مقدمة

أكثر من نصف البروتينات المعروفة مصابة بالجليكوزيلات ، لكننا بدأنا مؤخرًا فقط في فهم أهمية السكريات قليلة السكاريد المعقدة (الجليكانات) المرتبطة بالعمود الفقري للبروتين [1]. ربما لا يكون هذا مفاجئًا ، لأن التراكيب المتفرعة للسكريات تجعل تحليل مركبات الجليكوكونج أكثر تحديًا بكثير من تحليل تسلسل الحمض النووي والبروتين الخطي. ومع ذلك ، فإن جزءًا مهمًا من أكثر من نصف جميع البروتينات ، وتقريبًا جميع البروتينات الغشائية وخارج الخلية عبارة عن غليكانات [2]. لكي نتمكن من فهم وظيفة البروتينات السكرية ، علينا أيضًا أن نفهم شقوقها الجليكان. هذا مهم بشكل خاص في مجال التشخيص الجزيئي ، حيث يثبت الجليكان أنه أكثر وأكثر أهمية [3].

هياكل الجليكان معقدة للغاية ويتطلب تحليلها طرقًا معقدة تستغرق وقتًا طويلاً مثل HPAEC أو HLPC العادي أو قياس الطيف الكتلي [4] ، [5] ، [6]. هذه الطرق ليست ملائمة في المختبر السريري الروتيني ، وهناك حاجة إلى طرق أبسط لتمكين تحليل الارتباط بالجليكوزيل للتطبيقات السريرية. منذ تقديمه في أوائل السبعينيات [7] ، تم استخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) في تطبيقات مختلفة ، بما في ذلك تحليل الارتباط بالجليكوزيل. بالإضافة إلى الطرق التي تستخدم أجسامًا مضادة محددة لتحليل الارتباط بالجليكوزيل ، تم أيضًا تطوير طريقة معدلة تستخدم الليكتين بدلاً من الأجسام المضادة (ELLA - مقايسة الليكتين المرتبطة بالإنزيم) [8]. على عكس طرق ELISA المختلفة المستخدمة الآن بشكل روتيني في الاستخدام السريري ، يتم استخدام طرق ELLA من قبل عدد صغير من مختبرات البحث (66244 مقالة مع ELISA مقابل 86 مقالة مع ELLA في عنوان أو الملخص مجالات PubMed بين عام 1971 عندما تم استخدام ELISA لأول مرة و 2006). أسباب هذا الموقف معقدة للغاية ، وتشمل طبيعة الارتباط بالجليكوزيل ، والطريقة التي يتفاعل بها الليكتين مع البروتينات السكرية. يتعرف الليكتين على هياكل كربوهيدراتية محددة (على الأقل في حالة الليكتينات النباتية التي يتم استخدامها كأداة لتحليل الارتباط بالجليكوزيل) بشكل عام لا تتفاعل مع العمود الفقري للبروتين الذي ترتبط به هذه الهياكل. وهكذا ، عندما يتم استخدام الليكتينات لدراسة الارتباط بالجليكوزيل ، فإنها تقيس وجود بنية كربوهيدرات مقابلة على جميع البروتينات في العينة التي تم تحليلها وليس فقط على بروتين فردي مهم. لتكون قادرًا على تحليل الارتباط بالجليكوزيل لبروتين معين ، يجب إما تنقية هذا البروتين أو التقاطه بأجسام مضادة محددة يتم امتصاصها في لوحة ميكروتيتر. التنقية المسبقة للبروتين ليست عملية لأغراض التشخيص ، وبالتالي فإن التقاط- ELLA سيكون طريقة الاختيار. ومع ذلك ، فإن الأجسام المضادة هي أيضًا غليكوزيلاتي مما يعيق بشكل كبير استخدامها لهذا الغرض ، حيث يرتبط الليكتين ليس فقط بالجليكان الموجود على البروتين الذي تم التقاطه ، ولكن أيضًا بالجليكان الموجود على الأجسام المضادة المستخدمة لالتقاط البروتين من العينة.

في هذه الدراسة ، اخترنا الترانسفيرين كبروتين نموذجي لتطوير اختبار بسيط وسريع لربط البروتين بالجليكوزيل. المصل الترانسفيرين هو بروتين مثير للاهتمام بشكل خاص لتحليل السيالة. إن غالبية جزيئات الترانسفيرين في الدورة الدموية يتم جليكوزيلاتها عن طريق ربط اثنين فقط من الجليكانات الحيوية البسيطة (الشكل 1) [9] مما يبسط تفسير النتائج التجريبية. تم الإبلاغ عن تغييرات في الارتباط بالجليكوزيل في الترانسفرين في العديد من الأمراض [10] ، [11] ، [12] ، كما يتم استخدامها لتحديد الاضطرابات الخلقية للارتباط بالجليكوزيل وأمراض الكبد [13]. ومع ذلك ، فإن جميع الأساليب المطبقة سابقًا تستغرق وقتًا طويلاً ولا يمكن تطبيقها في المختبر السريري الروتيني. بهدف تمكين التحليل الروتيني لسيالة الترانسفيرين في الدم ، قمنا بتطوير طريقة ELLA بسيطة وموثوقة تلتقط الترانسفيرين باستخدام الأجسام المضادة المؤكسدة بالدوريات ومقارنة السيالة بالعينات القياسية.


إليسا الخدمات ذات الصلة

سواء كان إنشاء أجسام مضادة مخصصة لـ ELISA أو جلب مجموعة أدوات ELISA داخل الشركة ، فإن GenScript هنا للمساعدة. تعد خدمة MonoExpress & # 8482 الخاصة بنا مثالية للحصول على ELISA المباشر النظيف والواضح بينما تعد خدمة PolyExpress & # 8482 مثالية لتوليد الأجسام المضادة للكشف عن هدفك. تتكامل خدمة وضع العلامات على الأجسام المضادة الخاصة بنا بسلاسة مع أي مشروع ، مما يجعل إنشاء ELISA المخصص أمرًا سهلاً. حتى أننا ننتج أجسامًا مضادة مقترنة مُحسَّنة من أجل ساندويتش ELISA المخصص. تشمل بعض الخدمات الأخرى ذات الصلة ما يلي:

    جعل اختبار PK أو PD لأدوية الأجسام المضادة العلاجية أمرًا سهلاً حيث لا يكتشفان سوى CDR للجسم المضاد المستهدف. تخصصنا. يتحايل على إنتاج مستضد البروتين في المختبر ويتعامل مع الأهداف الصعبة. توفير ما يصل إلى 1 مجم من الأجسام المضادة المؤتلفة في أقل من 3 أسابيع للفحص السريع.

مع 12 عامًا من الخبرة في تطوير الأجسام المضادة المخصصة ، فإن مشروعك في أيدي الخبراء. احصل على اقتباس اليوم!


شاهد الفيديو: How do monoclonal antibodies work? Rituximab, infliximab, adalimumab and others (أغسطس 2022).